대한치과의사협회 자재·표준위원회에서는 국제표준화기구 치과기술위원회(ISO/TC 106)에서 심의가 끝나 최근 발행된 치과 표준을 소개하는 기획연재를 2014년 2월부터 매달 게재하고 있습니다. 환자 진료와 치과산업 발전에 많은 도움이 되기를 바랍니다.

국제표준화기구/치과전문위원회(ISO/TC 106)에서 치과재료의 항균력 평가에 대한 국제표준을 제ㆍ개정하는 작업반은 TC 106 직속 산하의 작업반(Working Group, WG)인 WG 10이다. TC 106 산하 WG 10은 생물학적 평가(Biological Evaluation)를 담당하고 있으며, 컨비너(Convenor)는 TC 106의 전체 의장인 Prof. Dr. Gottfried Schmalz이다. 간사(Secretary)는 캐나다치과의사협회의 Ms. Katie Lee가 수임하고 있다. 

TC 106/WG 10에서는 ‘ISO 3990 치과 - 치과용 수복재, 합착재, 열구 전색재 및 교정용 접착 또는 합착 재료의 항균력 평가’의 제정과 ‘ISO 7405 치과 - 치과에서 사용되는 의료기기의 생체적합성 평가’의 개정을 주요 프로젝트로 추진하였으며, 대한민국은 ISO 7405 부록 E 작성을 위한 task force에 참여하는 등 일본, 독일, 미국 등과 함께 적극적으로 활동하고 있다. 

치과용 수복, 합착 재료의 항균력을 평가하는 방법과 요구사항에 대한 국제표준은 ‘ISO 3990 치과 - 치과용 수복재, 합착재, 열구 전색재 및 교정용 접착 또는 합착 재료의 항균력 평가’로 2023년 7월에 발행되어 그 내용을 정리한다. 이번 연재를 통하여 ISO 3990의 내용인 치과재료의 항균력을 평가하는 방법과 요구사항에 대하여 소개하고자 한다. 

<표준의 목적>
항균 효과를 주장하는 치과재료의 항균 활성을 평가하기 위한 시험 방법을 제시함으로써 치과재료의 안전성과 효율성을 증진시키기 위함

<적용 범위>
대상: 치과용 수복재, 합착재, 열구 전색재, 교정용 접착 또는 합착 재료
제외: 치수복조재, 근관 충전재, 치과용 임플란트/임플란트 시스템, 나이트가드, 3D 프린팅 재료

<시험방법>
시험은 최소 3회의 독립적 시험이 수행되어야 하며, 각 시험마다 최소 3개의 반복 실험이 포함되어야 한다. 
1) 용출 시험: 시험 재료에서 용출되는 물질이 세균 배양액에 노출되어 나타나는 항균 효과를 평가
A. 양성 대조 물질로 0.2% chlorhexidine digluconate를 사용한다. 
B. 음성 대조 물질로는 세균 배양에 사용되는 영양 배지(표 1 참고)를 포함하여 PTFE 샘플을 사용한다. 
C. 모든 시험 및 대조 재료는 24시간 동안 (37±1) ℃ 멸균수에 보관 후, 영양 배지(혈청 포함) 및/또는 PBS를 이용하여 (37±1) ℃에서 (24±2) 또는 (72±2) 시간 용출한다. 10회 연속 추출을 시행한 용출물을 시험에 사용한다.  
D. 세균 배양액 또는 biofilm이 있는 96 well 플레이트에 모든 용출물(시험물질)과 양성/음성 대조 물질을 추가하고 세균 배양 조건에 적합한 환경에서 추가 배양한다. 
E. CFU 분석을 통해 세균의 복제 능력 감소를 평가함으로써 항균 효과를 측정한다(유세포 분석 또는 MTT 시험법으로 평가할 수 있다.)

2) 직접 접촉 시험: 시험 재료 표면과 세균의 직접적인 접촉을 통해 나타나는 항균 효과를 평가
A. 시험재료와 대조 재료를 지름 10 mm, 두께 1 mm의 디스크 형태로 준비한다. 
B. 양성 대조 재료로 구리판을 사용하고, 음성 대조 재료로 PTFE를 사용한다. 
C. 모든 시험 및 대조 재료는 10회 연속 추출( 1) C. 참조) 및 24시간 동안 (37 ± 1) ℃ 멸균수에 보관 후 사용한다. 
D. 시험 및 대조 물질이 들어있는 48 well 플레이트에 세균 배양액을 넣어 부유 배양하거나 biofilm 형성을 위해 배양한다. 
E. CFU 분석을 통해 세균의 복제 능력 감소를 평가함으로써 항균 효과를 측정한다(유세포 분석 또는 MTT 시험법으로 평가할 수 있다.)

* 시험재료의 용출 시에는 모든 표면이 용매에 노출 되었는지 확인해야 한다. 시험재료들이 서로 들러붙어 있으면 용출되지 못한 표면이 생기고 잘못된 시험 결과가 나올 수 있다. 용출을 위한 적절한 샘플 적재용 선반의 예는 그림 1과 같다. 

<요구사항>
항균 활성이 있다고 주장하는 재료는 용출물 시험의 경우 음성 대조 재료에 비해 99.9% 이상 세균 복제 능력 감소가 나타나야 하며, 직접 접촉 시험의 경우 음성 대조 재료에 비해 99% 이상 세균 복제 능력 감소가 나타나야 한다. 

<최종 시험 보고서 작성>
시험이 끝나면 ISO 3990에 나열된 시험 절차를 제시하는 최종 시험 보고서를 작성한다. 이 최종 시험 보고서에는 최소한 다음 항목의 정보가 포함된다.
1) 제품 이름
2) 제조자 이름
3) 제조 장소(가능한 경우)
4) 시험된 재료의 로트 번호
5) 제품의 사용 기한(제공된 경우)
6) 적용된 표준과 발행일(예: KS P ISO 3990:2023)
7) 제품 평가 기관의 이름 및 평가 장소
8) 평가 일자
9) 균주, 그 선택 근거 및 출처
10) 사용된 영양 배지의 회사 이름 및 배치
11) 평가 방법 및 근거
12) 연속 추출 주기 절차
13) (해당되는 경우) 용출 절차 및 가능하면 침출 물질의 특성 및 농도
14) 음성, 양성 및 기타 대조 재료
15) 관측된 (또는 관측 되지 않은) 항균 활성 및 적절한 통계 분석을 포함한 기타 관측 사항
16) 결과 평가를 위해 필요한 기타 모든 관련 자료
17) 서명 및 일자를 포함한 보고서 작성자의 식별

<기대효과> 
ISO 3990의 제정은 치과재료의 항균 효과를 체계적이고 일관된 방법으로 평가할 수 있도록 하여 치과재료의 개발과 평가에 있어 중요한 기준이 될 것으로 예상된다. 또한 제조사가 국제 표준을 준수하여 제품을 개발/제조함으로써 글로벌 시장에서의 경쟁력을 갖추는데 도움이 될 수 있다. 

ISO 3990은 치과 의료인과 관련 연구자들에게 치과재료의 항균 효과를 평가할 수 있는 중요한 도구로 활용될 것이며, 효과가 입증된 재료를 선택함으로써 임상에서 보다 안전하고 효과적인 치료를 제공할 수 있다. 

ISO 3990의 제정은 치과 산업의 전반적인 품질 향상과 함께 항균 제품의 신뢰성을 높이는 데 중요한 역할을 할 것으로 사료되며, 궁극적으로 환자들의 구강 건강을 보호하는 데 기여할 것이다.